Lezioni in aula e attività in laboratorio.
Avere sostenuto l'esame di Genetica. Nel caso di richieste superiori al numero programmato di 25, la selezione verrà effettuata sulla base del voto conseguito nell'esame di Genetica. A parità di voto dell'esame di Genetica, verrà considerata la votazione conseguita nell'esame di Citologia e Istologia. Per accedere alle attività in laboratorio è necessario avere un attestato di un corso sulla Sicurezza nei luoghi di lavoro.
Le colture cellulari in vitro. Le cellule in coltura primaria e le linee cellulari. I terreni di coltura. Modalità di mantenimento delle colture cellulari. La crio-conservazione e le procedure di congelamento/scongelamento delle cellule.
Citogenetica classica. Preparazione dei cromosomi metafasici da colture cellulari e da linfociti. Tecniche di colorazione e di bandeggio dei cromosomi e osservazione al microscopio.
Citogenetica molecolare. L’ibridazione in situ fluorescente (FISH). Le sonde a DNA: metodi di preparazione, di marcatura e di utilizzo. La dual-color e la multicolor FISH. Acquisizione delle immagini mediante microscopia a fluorescenza e analisi dei risultati.
Metodi di base per la preparazione del DNA. La preparazione di DNA genomico e di DNA plasmidico. I diversi protocolli di estrazione del DNA da batteri e da cellule eucariotiche. I sistemi automatizzati di preparazione del DNA.
I polimorfismi del DNA. Gli enzimi di restrizione. La PCR. Gli RFLP e il loro utilizzo nella diagnostica biomedica. L’analisi del genotipo mediante indagine con RFLP. L’analisi dei risultati mediante elettroforesi. La PCR multipla e gli STR (cenni).
L’analisi dell’espressione genica. Estrazione di RNA da cellule e tessuti. Preparazione del cDNA e modalità di utilizzo. Metodi di analisi qualitativa e quantitativa di un trascritto. La PCR quantitativa. Progettazione di una rt-PCR quantitativa e analisi dei risultati.
Materiale didattico sarà fornito dal docente durante le lezioni.
Libri su argomenti specifici possono essere ultilizzati per approfondire alcuni argomenti, quali ad esempio:
Bridger JM and Volpi EV. Fluorescence in situ hybridization (FISH): protocols and applications. Humana Press.
Campbell LJ. Cancer cytogenetics: methods and protocols. Humana Press.
Brown TA. Biotecnologie molecolari: principi e tecniche. Zanichelli.
Argomenti | Riferimenti testi | |
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1 | ArgomentiRiferimenti testi1Le colture cellulari in vitro.PDF 1: colture cellulari2Citogenetica classica.PDF 2: Citogenetica3Citogenetica molecolare.PDF 3: citogenetica molecolare4Preparazione del DNA, PCR e polimorfismi.PDF 4: PCR e polimorfismi.5Espressione genica.PDF 5: qRT-PCR. |
Durante le attività laboratoriali verranno valutati, partecipazione, interesse, capacità di lavorare con relativa autonomia.
Alla fine del corso verranno verificate conoscenze e competenze con un test a risposta multipla (20 domande a risposta multipla e due domande a risposta aperta) e in una prova orale.
Gli enzimi di restrizione.
La PCR quantitativa.
Gli RFLP e il loro utilizzo nella diagnostica biomedica.
Le linee cellulari e le cellule in coltura primaria.